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氨芐青霉素-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的制備方法有哪些

2025-05-07 [68]

氨芐青霉素-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的制備方法主要有以下幾種:

化學(xué)交聯(lián)法

  • 原理:利用化學(xué)交聯(lián)劑將氨芐青霉素與過(guò)氧化物酶進(jìn)行共價(jià)連接。常用的交聯(lián)劑有戊二醛等,它能與氨芐青霉素和過(guò)氧化物酶分子上的氨基等活性基團(tuán)反應(yīng),形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵。

  • 步驟:首先將氨芐青霉素和過(guò)氧化物酶分別溶解在適宜的緩沖液中,然后在一定的反應(yīng)條件下(如適宜的pH值、溫度和反應(yīng)時(shí)間等)加入交聯(lián)劑進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)結(jié)束后通過(guò)透析、離心等方法進(jìn)行純化,得到氨芐青霉素-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物。

基因工程法

  • 原理:通過(guò)基因工程技術(shù)將氨芐青霉素抗性基因與過(guò)氧化物酶基因進(jìn)行融合表達(dá),從而得到氨芐青霉素-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物。

  • 步驟:首先構(gòu)建含有氨芐青霉素抗性基因與過(guò)氧化物酶基因融合的重組質(zhì)粒,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到合適的宿主細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),最后通過(guò)細(xì)胞破碎、離心、層析等方法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,得到氨芐青霉素-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物。

其他方法

  • 利用氨芐青霉素抗性質(zhì)粒載體:氨芐青霉素抗性質(zhì)粒載體,其質(zhì)粒骨架上含有抗氨芐青霉素基因,該基因?yàn)棣?內(nèi)酰胺酶的編碼基因與β-半乳糖苷酶α肽編碼基因的融合基因。通過(guò)對(duì)現(xiàn)有質(zhì)粒載體質(zhì)粒骨架上氨芐青霉素抗性基因的改造,來(lái)解決β-內(nèi)酰胺酶泄漏的問(wèn)題,進(jìn)而可用于制備氨芐青霉素-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物。

  • 在特定條件下利用菌體或細(xì)胞制備:例如使用醛縮酶產(chǎn)生菌或通過(guò)重組DNA轉(zhuǎn)化的細(xì)胞,在培養(yǎng)的同時(shí),將底物直接加入培養(yǎng)液中,或使用從培養(yǎng)液中分離出來(lái)的菌體、洗凈的菌體等進(jìn)行制備。

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